T7噬菌体文库构建流程

作为噬菌体展示技术‍的两种形式，M13噬菌体含有单链DNA，而T7噬菌体由双链DNA组成，其表现出更高的稳定性，并且在复制过程中不易发生突变。T7噬菌体可以通过其尾部和尾部纤维蛋白（称为受体结合蛋白）识别宿主的脂多糖（LPS），然后杀死敏感基因型的大肠杆菌。此外，T7噬菌体可作为病毒相关研究的模型系统，T7噬菌体RNA聚合酶因其在原核生物、真核生物和无细胞生物等多种宿主系统中的强大功能。T7噬菌体的基因组包含约40KB的双链DNA分子，这些双链DNA分子封装在衣壳蛋白的二十面体中，编码约50种蛋白质。许多方法，如体外直接基因操作、CRISPR和重组，由于其基因组小、功能基因组学阐明良好、生命周期快、在生物应用中具有非凡的优势，可用于构建重组T7噬菌体。T7噬菌体文库构建已被用于表面和非表面基因表达以及构建多肽、cDNA、基因组DNA和抗体的展示文库。这使得T7噬菌体不仅可以用作抗菌剂，还可以用于药物靶点筛选，在器官靶点筛选（如脑、肝、肺）、抗体识别靶点筛选（如IgA、IgY和IgE）、生理机制的研究（如性激素、组织型转谷氨酰胺酶，和胚胎发生晚期丰富的蛋白质）等，也可用于各种疾病的诊断和治疗。

T7噬菌体文库构建流程：

首先卡梅德生物进行噬菌体抗体文库构建，设计合适的引物继续PCR扩增，然后将扩增产物与T7噬菌体载体进行酶切连接，构建重组噬菌体质粒。再将质粒转化到TG1感受态细胞中，将细胞涂布在含有适当抗生素的培养基上，筛选转化子后进行扩大培养。通过多轮培养，使噬菌体在细菌中复制并表达目标蛋白质或多肽。对噬菌体文库进行纯化，去除杂质和未结合的噬菌体。卡梅德生物最后从保存的噬菌体文库中取适量样品进行效价检测，以评估文库的质量和多样性。

7轮亲和筛选后T7噬菌体亚库扩增产物的凝胶电泳

6轮亲和选择后滴定T7噬菌体

由于T7噬菌体具有基因组小、功能基因组学阐明清楚、生命周期快、稳定性高等优点，在生物学、医学等诸多领域得到了广泛的应用。此外，T7噬菌体展示技术在过敏反应、阿尔茨海默病、炎症反应等多种疾病中都能治疗应用。

卡梅德生物具有多年的T7噬菌体文库构建经验，可以提供噬菌体抗体文库构建服务、噬菌体抗体库筛选服务等多种噬菌体服务以及抗体定制、重组抗体纯化等全链条服务。

参考文献：

[1] Higashi K, Oda S, Fujii M, Nishida F, Matsumoto H, Morise J, Oka S, Nonaka M. Construction of a T7 phage random peptide library by combining seamless cloning with in vitro translation. J Biochem. 2023 Dec 20;175(1):85-93.   

[2] Deng X, Wang L, You X, Dai P, Zeng Y. Advances in the T7 phage display system (Review). Mol Med Rep. 2018 Jan;17(1):714-720.

[3] Yu T, Sun Z, Cao X, Pang Q, Deng H. Recent trends in T7 phage application in diagnosis and treatment of various diseases. Int Immunopharmacol. 2022 Sep;110:109071.