T7噬菌体文库构建建议

作为噬菌体展示平台，M13含有单链DNA，而T7噬菌体由双链DNA组成，其表现出更高的稳定性，并且在复制过程中不易发生突变。T7噬菌体可以通过其尾部和尾部纤维蛋白（称为受体结合蛋白）识别宿主的脂多糖（LPS），然后杀死敏感基因型的大肠杆菌。此外，T7噬菌体可作为病毒相关研究的模型系统，T7噬菌体RNA聚合酶因其在原核生物、真核生物和无细胞生物等多种宿主系统中的强大功能。T7噬菌体的基因组包含约40 KB的双链DNA分子，这些双链DNA分子封装在衣壳蛋白的二十面体中，编码约50种蛋白质。许多方法，如体外直接基因操作、CRISPR和重组，由于其基因组小、功能基因组学阐明良好、生命周期快、在生物应用中具有非凡的优势，可用于构建重组T7噬菌体。T7噬菌体文库构建已被用于表面和非表面基因表达以及构建多肽、cDNA、基因组 DNA 和抗体的展示文库。这使得T7噬菌体不仅可以用作抗菌剂，还可以用于药物靶点筛选，在器官靶点筛选（如脑、肝、肺）、抗体识别靶点筛选（如IgA、IgY和IgE）、生理机制的研究（如性激素、组织型转谷氨酰胺酶，和胚胎发生晚期丰富的蛋白质）等，也可用于各种疾病的诊断和治疗。

T7噬菌体的详细结构

T7噬菌体展示系统是一种可以快速将天然产物与其细胞靶点连接起来的强大工具，但该技术有一些显著的局限性，在生物淘选之前必须对其进行评估。在T7 Select载体上展示的蛋白质的所要求的大小上限是1200个氨基酸。在噬菌体T7表面，超大型蛋白质、多结构域蛋白质和膜相关蛋白质不可能被正确展示，而片段、单蛋白结构域和胞外结合环可能保留了与天然产物/小分子结合的能力。在大多数T7噬菌体文库构建中，三分之二的外源基因与噬菌体外壳蛋白基因一起插入读框外，导致展示不是由所连接的基因编码的随机肽片段。如果使用非定向克隆方法，则一半的克隆也具有反向插入的外源基因。因此，在典型的T7文库中，只有六分之一的克隆具有展示功能性蛋白质的潜力。Rosetta-gami细胞系提供蛋白还原酶和谷胱甘肽还原酶，以创造一个与二硫键形成相容的细胞质环境，并且还提供在大肠杆菌中很少使用的密码子的tRNA，这些问题至少在理论上得到了解决。

上述T7噬菌体展示系统的许多理论限制实际上在实践中是无关紧要的，因为可以在小体积中获得非常大量的噬菌体颗粒。T7噬菌体展示技术的另一个显著优点是它的速度，上面概述的整个生物淘选过程仅需1周即可完成。因此，即使T7噬菌体展示技术不能鉴定特定天然噬菌体的细胞靶标，产品，这个结论可以很快得出，研究人员可以转移到下一个技术或下一个化合物，几乎没有时间损失。

由于T7噬菌体具有基因组小、功能基因组学阐明清楚、生命周期快、稳定性高等优点，在生物学、医学等诸多领域得到了广泛的应用。此外，T7噬菌体在过敏反应、阿尔茨海默病、炎症反应等多种疾病中都能治疗应用。

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参考文献：

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