




纳米抗体的发现源于对骆驼科动物体内重链抗体的研究。这类抗体主要由单一的重链构成,缺乏传统IgG抗体的轻链,其结构独特。早在1990年代,科学家们发现这种重链抗体不仅小巧(约15 kDa),而且在高温、极端pH值和有机溶剂中仍能保持稳定,显示出其在生物医学研究中的巨大应用潜力。
随着分子生物学和蛋白质工程技术的进步,研究人员逐渐能够有效分离、克隆和表达这些纳米抗体,促进了抗体药物的开发。纳米抗体的高特异性和高亲和力使其成为靶向特定抗原的理想选择,同时其易于改造的特性为其在药物研发、诊断、成像和治疗等领域奠定了基础。此外,骆驼科动物(如美洲驼和羊驼)除了产生常规IgG外,还能产生一种称为单域抗体的功能性单链抗体,这些抗体仅由重链构成,缺乏轻链及功能性CH1和CH4结构域。这种单域抗体的独特性质使其在生物技术应用中展现出显著优势,为新型生物治疗策略的开发提供了重要工具。

图1羊驼抗体肽结构域示意图
羊驼VHH抗体(单域抗体)的优点:(1)在高温和pH下的稳定性;(2) VHH可以识别通常不被常规抗体识别的抗原位点;(3)它们的小分子片段有助于快速组织渗透和标记应用,包括跨越血脑屏障;(4)用于大规模生产节约成本的替代品。
卡梅德生物使用M13噬菌体的pIII蛋白进行VHH抗体(纳米抗体)的表面展示。我们的科学家构建了带有Flag和6×His标签双标签的噬菌体载体,并制备了具有108转染效率的TG1和XL1 Blue宿主细胞,经过2-3次转染和扩增,可以为客户提供高质量的羊驼纳米抗体展示文库,其足够的库容量为108-109,包装容量为1013-1016/ml。通过抗原限制压力进行多轮纳米抗体文库筛选,可获得多达20-30株高亲和力噬菌体菌株。最后通过简单的IPTG诱导,可以在1-2周内获得大量抗体表达产物,以满足客户的研究需求,例如FACS(流式检测)和细胞活性测试。
羊驼纳米抗体库构建流程:

羊驼纳米抗体库构建服务内容:
步骤 | 服务内容 | 周期 |
羊驼免疫 | * 一只健康的成年羊驼(28-36月大)免疫5-7次 * ELISA效价测定 * 抗血清采集 | 8-10周 |
cDNA制备(客户可以提供细胞) | * 总RNA提取 * 高保真RT-PCR制备cDNA | 1个工作日 |
VHH纳米抗体库的构建 | * 引物设计与合成 * 以cDNA为模板,PCR扩增重链抗体基因可变区 * 噬粒构建与转化:酶切、连接噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库 * 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定、测序、分析抗体序列 | 3-4周 |
VHH纳米抗体文库筛选(3轮) | * 抗原极限施压法进行3轮筛选 * 鉴定:随机挑选96个克隆,ELISA效价测定 * 10-15个阳性克隆表达制备VHH抗体上清 | 4-5周 |
交付:
--羊驼VHH纳米抗体库2ml,>1⨯1013/ml噬菌体颗粒,有效库容量>108
--表达10-15个阳性克隆以制备VHH抗体上清液
--实验报告:实验步骤和序列测定信息和比对结果
--原始数据:可根据客户要求提供完整实验记录原始数据
服务优势:
--可以根据客户需求提供驼源免疫库构建服务和天然羊驼抗体库筛选服务
--约16-19周可获得周期短、质量高的纳米抗体文库和单克隆抗体细胞系
--高库容量:足够的库容量108-109/免疫库
--高亲和力抗体构建
--个性化方案分析和定制
--完整的文件追溯提和QC质量控制文件

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