噬菌体肽库筛选服务介绍

1. 多肽文库筛选概念

多肽文库是指大量特定长度且序列不同的小肽的集合，它包括了该长度短肽中各种（或绝大部分）氨基酸序列的排列组合。多肽文库是一种强大的筛选工具。它用于从大批量多肽中筛选极少量具有关键生物活性的多肽。

2. 多肽文库类型

（1）重叠肽库：单个肽可以分成几个重叠的片段。由此产生的重叠肽库随后可用于包括连续和线性表位作图在内的过程。

（2）截断肽库：截断肽库可用于预测确定最佳表位活性的最小长度氨基酸。

（3）丙氨酸肽扫描文库：每个氨基酸残基都被丙氨酸单独和系统地取代。该库可以快速确定每个氨基酸对肽功能的贡献。

（4）随机肽库：随机肽库被设计为序列优化不可或缺的工具，选定的位置同时被所有20种天然氨基酸取代，可以增加肽活性。

（5）乱序肽库：乱序库在所有肽库中具有最高的变异性。所得肽通常用作阴性对照，以表明特定序列对蛋白质功能或活性至关重要。它也是一种用于寻找新线索的随机筛选工具。

（6）位置肽库：肽序列中选定的位点或区域被系统地替换为所有其他天然氨基酸。这允许识别增强肽活性的氨基酸。

图1：6种多肽文库类型展示图

3. 多肽文库筛选应用

多肽文库在蛋白质组学及其相关领域应用范围非常广泛，如药物研发（科研级 Bevacizumab （cat：YR1001））、蛋白-蛋白相互作用、抗原表位筛选、GPCR配体筛选、蛋白功能分析、酶底物或抑制剂筛选、信使分子研发及多肽/蛋白信号对答等。

4. 多肽文库筛选技术亮点

（1）可以高通量生产，筛选效率高

（2）可快速制备可溶抗原

（3）可以准确的定位抗原决定簇，广泛用于药物开发

5. 卡梅德生物能够为客户提供高质量的肽库筛选服务

基于噬菌体平台，卡梅德生物拥有多样性文库，如下图2，可以为客户构建随机7肽文库，12肽文库，15肽文库等。卡梅德生物提供的T7噬菌体展示平台是一种超高通量的配体筛选方式，通过该技术平台可以构建多达10^13/ml个经过噬菌体展示的多肽或抗体克隆，平均可以做到独立克隆数为10^9-10^10/ml，经过后续多轮淘筛可以提供多达10^5有效多肽或抗体的序列。

图2：卡梅德生物多样性文库

6. 卡梅德生物为客户提供肽库筛选服务的全流程介绍

肽库筛选主要分为以下大致流程：目的蛋白质量验证，噬菌体滴度检测，噬菌体扩大培养，噬菌体淘选，测序，流程图如下：

图3：噬菌体展示肽库构建流程

6.1 目的蛋白质量验证

目的蛋白进行SDS-PAGE电泳，要求蛋白纯度>95%，才能进行下一步文库筛选。

6.2 噬菌体滴度检测

TG1菌株接种到LB培养基进行活化培养，LB培养基添加琼脂糖后，按照梯度稀释法培养噬菌体，培养完成的噬菌体涂布至琼脂平板，进行噬菌斑计数。

6.3 噬菌体扩大培养

TG1菌株培养至OD600 0.4 ~0.6后，接种到经过扩大培养的宿主菌种，震荡离心，上清即为噬菌体培养物。

6.4 噬菌体淘选

将纯化的目的蛋白用96孔酶标板进行抗原包被过夜，脱脂内粉进行封闭，加入扩大培养的噬菌体孵育，缓冲液多次洗脱，进行噬菌体滴度测定，浓缩纯化后等待下一轮筛选。重复以上步骤2次，完成后两轮筛选。

6.5 测序

从第三轮筛选后的细菌平板上挑取48个单克隆，经过扩增培养后提取质粒进行测序。

7.多肽噬菌体展示文库筛选实验结果

图4：第三轮文库洗脱结果