VHH抗体序列诱导原理

纳米抗体,是一种备受关注的单域抗体,主要由羊驼免疫产生,但其他驼科动物,比如骆驼免疫也可产生。纳米抗体是重链可变区(VHH)组成的,其分子量约15kDa,是正常抗体的十分之一。虽然它分子量小,但它有了完整的抗原识别能力,展现出高亲和力、高特异性、优异的稳定性和穿透力。纳米抗体生产流程包括羊驼免疫、VHH抗体序列设计、VHH抗体表达与纳米抗体制备、纳米抗体文库构建和筛选等多个关键步骤。通过一系列流程,可以高效地进行纳米抗体合成,为疾病诊断与治疗、药物研发及环境监测等领域提供有力支持。

VHH序列可用的抗体片段适用于真核生物和原核系统中的直接工程设计和表达。当与方便的标签融合时,它们成为试剂,将其选择性结合能力与正交功能配对。由纳米抗体和大蛋白或短序列组成的几种免疫试剂已被设计用于提供廉价的即用型生物工具。在替代表达策略中进行选择的可能性至关重要,因为融合部分可能需要正确的折叠或翻译后修饰的特定条件。VHH抗体序列的诱导原理主要涉及到抗体产生、筛选和优化的一系列生物学过程。首先,卡梅德生物选择健康、无疾病的羊驼进行免疫,刺激其免疫系统产生免疫反应,这些动物能够产生单域抗体。从免疫后的羊驼PBMC中分离单B细胞,抽提RNA,再逆转录成cDNA。最后将其做为模板,并通过凝胶电泳筛选目标VHH序列。对筛选得到的VHH抗体序列进行测序分析然后进行VHH抗体序列设计,这一步有助于提高VHH抗体的稳定性和亲和力,可以进行定点突变和稳定性筛选。通过引入某些特定突变进行筛选等方法,卡梅德生物获得更高稳定性VHH抗体突变体。然后将筛选得到的VHH序列插入适当的表达载体中(如质粒、病毒等),进行VHH抗体表达。最后通过噬菌体展示技术,让VHH抗体表达在噬菌体表面,然后利用孵育抗原和ELISA等方法筛选出能够特异性结合目标抗原的纳米抗体。卡梅德生物对筛选出的纳米抗体进行测序和验证,确保纳米抗体序列的正确性和功能活性。

传统抗体、重链抗体与纳米抗体的示意图-卡梅德科技.png

传统抗体、重链抗体与纳米抗体的示意图

卡梅德生物通过羊驼免疫来进行纳米抗体生产,为客户提供包括纳米抗体制备、纳米抗体文库构建和筛选,VHH纳米抗体构建等一系列服务。卡梅德生物通过纳米抗体合成以及噬菌体展示开发平台,能够高效构建并筛选包括Fab、scFv及VHH(纳米抗体)在内的多种类型噬菌体抗体文库,为客户快速提供定制化的、高特异性的抗体解决方案。


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Antibody humanization by redesign of complementarity-determining region residues proximate to the acceptor framework. Methods. 2014 Jan 1;65(1):68-76.

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