蓝白斑筛选原理

噬菌体展示技术基于噬菌体病毒粒子表面肽序列的呈递，开发于30 多年前。能够感染大肠杆菌的丝状噬菌体物种表现为由宿主细菌分泌的细长丝，无需细胞裂解。由于菌毛特异性丝状噬菌体种类易于操作且在一定温度和pH值范围内保持稳定性，因此可作为多肽文库筛选技术的可靠工具。噬菌体展示技术的改进使我们能够在生物技术的众多领域采用这种方法，如免疫学和生物医学应用、新材料的形成等等。研究表明，在静脉内施用靶向多肽筛选选择位于特定部位的肽。这种方法导致了对肿瘤生成相关靶向的组织特异性靶向。此外，它已被用于指导促凋亡肽、药物、抑制剂和递送，以获得更有效的治疗药物。

噬菌体展示文库中每个克隆都包含一个随机的外源DNA 插入片段，因此在其表面呈现不同的分子。噬菌体文库还易于工厂化生产，有大量商业试剂盒可用于执行普通分子生物学任务。根据不同目的，分为噬菌体展示肽库和抗体文库。此外，单个噬菌体展示肽库一旦产生就足以进行多个噬菌体肽库筛选。噬菌体展示技术允许轻松处理和高通量筛选数十亿个序列，当应用于抗体靶标时，多肽文库筛选能够鉴别各种不同表位。

噬菌体文库制备流程

噬菌体展示肽库中进行靶向多肽筛选，以鉴定和富集目标抗体序列。这种噬菌体肽库筛选通过固化或偶联来捕获靶抗原。当与抗原一起孵育时，噬菌体表面（溶液中纯化的病毒粒子）允许结合特异性抗体变体。酸洗脱是一种非特异性程序，通过削弱受体-噬菌体相互作用起作用，是最常见和可行的方案。竞争性洗脱使用已知的可溶性接头，该接头竞争噬菌体与固定化受体的相同结合位点，从而增加获得与靶标特异性相互作用的噬菌体克隆的可能性。

在噬菌体肽库筛选中，原理是有机化合物在酶的作用下，会被水解并随后氧化变成蓝色。因此，我们也可以使用这种蓝色染色作为我们感兴趣的基因的标记，通过将LacZ基因置于该基因的控制之下，从而肉眼分辨出我们想要结果。正常操纵子能够发生反应，但是IPTG抢先于蛋白发生反应，改变其构象。筛选成千上万的转化菌落并从它们的白色外观识别携带推定重组质粒的菌落是容易的。卡梅德生物可以利用蓝白斑进行多肽文库筛选和靶向多肽筛选。

参考文献：

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