蛋白纯化方法及原理

蛋白纯化技术作为现代生物技术的重要组成部分，为药物开发诊断、生物制剂的治疗市场、科学研究等提供了强大的工具。然而，如何高效的从表达系统中进行蛋白分离纯化，现在仍是生物领域的一项关键挑战。

重组蛋白纯化是指利用生物、物理、化学的手段，从复杂的混合物中提取并纯化出自己所需目标蛋白。在重组蛋白纯化过程中，我们可以从蛋白是否可溶角度将其分为：包涵体纯化和可溶性蛋白提取纯化。还可以从纯化方法角度将其分为：蛋白亲和纯化，蛋白分离纯化。

重组蛋白纯化示意图

GST可以作为一种可溶性蛋白大量表达，并具有充分的酶活性。此外，许多在表达时不溶的真核蛋白作为GST表达时至少部分可溶。当融合到另一种蛋白质的N端时，酶的活性通常会被保留下来。为了生成表达GST融合蛋白的结构体，可以使用标准克隆技术将编码感兴趣蛋白的序列插入到商业载体中，如pGEX（GE医疗保健）或pET（Novagen）系列质粒。GST 标记的蛋白质与固定在基质上的谷胱甘肽（例如琼脂糖）特异性结合，并且可以通过结合-洗涤-洗脱程序轻松从细胞裂解物中分离。GST融合蛋白纯化时，当蛋白通过GSH偶联的层析介质时，因高亲和力GSH捕获目标蛋白。然后可以通过酶切或化学方法去掉标签，完成GST融合蛋白纯化。

GST蛋白纯化示意图

天然蛋白纯化是指从天然的生物样品中，利用生物、物理、化学的手段，进行天然蛋白分离和天然蛋白提取，最终获得高纯度、高活性蛋白质的过程，天然蛋白纯化的过程不需要添加诱导剂进行蛋白诱导纯化。天然蛋白质分离技术分为多步，每一步的目的都是去除杂质，提高目标蛋白的纯度。

xx蛋白采用凝胶过滤层析的纯化SDS-PAGE结果

天然蛋白纯化是指从天然的生物样品中，进行天然蛋白分离和天然蛋白质提取，最终蛋白质的过程；重组蛋白纯化是重组蛋白诱导后，利用各种手段，纯化出自己所需重组蛋白的过程，天然蛋白质分离纯化的过程不需要添加诱导剂进行蛋白诱导纯化。

卡梅德生物有完整的蛋白纯化技术，完善的蛋白纯化体系，可以根据客户要求，选择最适分离方法和填料，完成天然蛋白和重组蛋白的纯化。经过卡梅德生物提取分离的天然蛋白，我们保证其活性，还可为客户提供后续的蛋白质测序服务，满足客户的后续实验要求。卡梅德生物同时可为客户提供多种重组蛋白纯化标签，包括His-tag、Flag-Tag、SUMO-Tag、Myc--Tag和GST-Tag等，用技术助力于每位客户的需求。

参考文献：

[1]Schäfer F, Seip N, Maertens B, Block H, Kubicek J. Purification of GST-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:127-39.

[2]Evans DR, Romero JK, Westoby M. Concentration of proteins and removal of solutes. Methods Enzymol. 2009;463:97-120.

[3]Jiang B, Wang L, Wang M, Wu S, Wang X, Li D, Liu C, Feng Z, Chi Y. Direct separation and purification of α-lactalbumin from cow milk whey by aqueous two-phase flotation of thermo-sensitive polymer/phosphate. J Sci Food Agric. 2021 Aug15;101(10):4173-4182.