sdAb噬菌体文库构建流程

噬菌体展示技术是一种众所周知的技术，用于选择与所需靶标结合的抗体。重组脱氧核糖核酸（DNA）技术和抗体工程的应用共同产生一种强有力的筛选工具来鉴定与特定靶结合并调节其功能的有用蛋白质。sdAb噬菌体展示文库构建噬形成了多种sdAbs的噬菌体库。噬菌体展示文库筛选出的物质与合成或天然靶点的结合，一般通过基本生物淘洗对其进行初步选择。生物淘洗中的细胞淘洗法是使用细胞作为靶点从中筛选，操作步骤简便、受环境影响小、可以外部控制流程。在免疫来源或幼稚来源产生的丝状噬菌体上显示的抗体可变区域文库允许选择源动物的天然免疫库中包含的结合元件。

抗体展示系统包括噬菌体、酵母、细菌和核糖体。在这些系统中，噬菌体展示文库作为一种通用的和广泛使用的工具，用于工程抗体和药物发现。单域抗体库构建的多样性在使用噬菌体展示技术分离对给定靶标具有高特异性的抗体中起关键作用。噬菌体展示技术允许通过与固定化或可溶性抗原结合、洗涤、洗脱和再扩增的几个循环来选择而不是筛选肽或蛋白质文库，该过程称为淘选。噬菌体展示文库由无数个单域抗体库构建而成。

骆驼科动物，包括羊驼，有三种已知的IgG同种型（IgG 1，IgG 2和IgG 3），其中，IgG 2和IgG 3是唯一的重链抗体（HCAbs）。单结构域抗体（sdAb），也称为VHH，来源于骆驼科动物中发现的HCAb的可变结构域，缺乏轻链（LC）组分。VHH表现出几种有利的性质，使它们对诊断和治疗应用有吸引力。与常规抗体相比，VHH的一个显著特征是其较小的尺寸。这种减小的尺寸增强了它们对组织的穿透，从而能够更有效地递送到靶部位。VHH在长时间暴露于高温下时也表现出显著的稳定性。可以用PCR扩增VHH区，以产生具有完全结合能力的较小抗体片段。这些小片段被称为纳米抗体（Nbs）或单域抗体（sdAb）。sdAb仅由VHH区域组成，并且由于它们的小尺寸而能够渗透到困难区域中，或者穿过HcAb和常规抗体都不能进入的物理组织。

构建流程:

先获为了完成单域抗体文库构建，我们用体外免疫骆驼后，提取mRNA，反转录，扩增VHH的基因片段，完成sdAb噬菌体展示文库构建。然后筛选文库分离抗原结合片段，并对抗原特异性噬菌体克隆进行测序。基于序列比对后，用斑点印迹法和噬菌体ELISA测试对抗原的结合亲和力。最后完成Fab噬菌体抗体库构建，卡梅德生物对其进行验证后，交付给客户。

羊驼sdAb抗体文库构建过程、噬菌体展示文库构建以及sdAb的应用示意图

卡梅德生物具有多年的重组抗体定制经验，提供多种不同抗体定制的方法，根据客户的具体研究需求为客户选择抗体。卡梅德生物可以提供sdAb抗体表达服务，scFv抗体生产服务、sdAb抗体人源化服务等多种抗体定制服务。同时，卡梅德生物还提供抗原制备、抗体定制、噬菌体文库构建、重组抗体纯化等全链条服务。